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【简答题】
我们实验室研究生做了一个如下的实验:将pdc基因(丙酮酸脱羧酶)克隆到pUC18载体中,以便在E.coli TOP10中表达,这个pdc基因两侧具有BamHI的位点,因此计划将它从BamHI的位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行:载体用BamHI切割后,立即用碱性磷酸酶处理,接着将处理过的载体同用BamHI切割的pdc基因混合,加入T4连接酶进行温育,连接后,将DNA同处理过的可以接受外源DNA的E.coli TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加有氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基的平板上。
实验中同时设置了4个对照:
对照1:将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。 对照2:将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用T4连接酶连接(但没有pdc基因)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用T4连接酶连接(但没有pdc基因)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备的,结果,在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(见下表1)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有的平板上都没菌落生长(见下表1)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(见下表1)。从实验平板上挑出12个菌落,分离质粒DNA,并用BamHI进行切割,其中9个克隆产生大小同载体pUC18一样的单一的一条带,另3个克隆中切出一个pdc基因,实验终于获得成功。
你如何看待第一次的实验结果?对照1的目的是什么?
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题目标签:
丙酮酸脱羧酶
碱性磷酸酶
感受态细胞
参考答案:
参考解析:
刷刷题刷刷变学霸
举一反三
【简答题】[配伍题,B型题] 主要存在于肝细胞线粒体中的酶是()属水解酶类的酶是() A . A.门冬氨酸氨基转移酶B . B.肌酸激酶C . C.乳酸脱氢酶D . D.碱性磷酸酶E . E.γ-谷氨酰基转移酶
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【判断题】革兰氏阳性细菌比革兰氏阴性细菌更难形成感受态细胞。
A.
正确
B.
错误
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【简答题】感受态细胞制备步骤 6 和 8 中都加入了 CaCl 2 目的一样吗?它们的作用分别是什么?
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【单选题】制备感受态细胞时,要用低渗CaCl2溶液在()℃时处理快速生长的对数期细菌
A.
0
B.
37
C.
42
D.
100
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【单选题】关于感受态细胞的下列说法不正确的是()
A.
有人工感受态细胞和自然感受态细胞。
B.
具有可诱导性。
C.
有可转移性。
D.
不同种细菌出现感受态的生理时期不同。
E.
不同种细菌出现感受态的比例不同。
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【多选题】感受态细胞影响转化率的因素有()
A.
生长状态
B.
氯化钙处理充分
C.
保存温度-20℃
D.
使用时迅速融化
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【单选题】在制备大肠杆菌感受态细胞时应取用( )的大肠杆菌。
A.
迟滞期
B.
对数期
C.
平台期
D.
衰亡期
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【单选题】男,5个月,人工喂养,已能抬头,多汗,烦躁不安。检查:前囟3cm×3cm,有枕、顶部颅骨软化。 此时做血液生化检查,其结果最可能为血钙、血磷、血碱性磷酸酶
A.
降低,降低、降低
B.
降低、增高、增高
C.
降低、降低、增高
D.
正常、降低、降低
E.
正常、降低、增高
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【简答题】我们实验室研究生做了一个如下的实验:将pdc基因(丙酮酸脱羧酶)克隆到pUC18载体中,以便在E.coli TOP10中表达,这个pdc基因两侧具有BamHI的位点,因此计划将它从BamHI的位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行:载体用BamHI切割后,立即用碱性磷酸酶处理,接着将处理过的载体同用BamHI切割的pdc基因混合,加入T4连接酶进行温育,连接后,将DNA同处理过的可以接受...
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