RIA可以测定大分子量与小分子量的物质,双位点IRMA只能测定在分子上具有2个以上抗原表位的物质。
剂量反应曲线又称标准曲线,即用标准物浓度对结合率作图。在RIA中被测定物质的浓度(量)可从标准曲线上查得。
纯化标志物的方法有利用分子筛机制的凝胶过滤法、利用游离125I与标志物分子极性差异进行吸附解离的离子交换层析法、按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移率不同进行分离纯化的聚丙酰胺凝胶电泳法以及高效液相色谱法。
放射免疫技术常用的放射性核素有125I、131I、3H、14C等,使用最广泛的是125I。
放射免疫分析抗体限量,定量标记抗原和待测抗原竞争限量抗体,属于竞争性免疫分析,其敏感性高、特异性强、精密度要高于酶免疫技术,常用于各种激素和药物的测定。荧光免疫技术多用于检测胰岛细胞抗体。
IRMA属固相免疫标记测定,抗原与过量的标记抗体在液相反应后加入免疫吸附剂,游离的标记抗体与免疫吸附剂结合被离心除去,然后测定上清液的放射性量。所以反应参效与待测抗原含量成正比。
放射免疫诊断盒购置后不能久置的主要原因:125I的半衰期为60天左右,随着时间延长计数率下降;125I可以从标记抗原上脱落。
采用放射性碘制备标志物的基本原理是以放射性碘原子通过取代反应置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。因此,凡蛋白质、肽类等化合物在结构上含有上述基团,均可用125I直接标记。而对那些不含上述基团的甾体激素或药物分子则必须在分子结构上连接相应基团才能用于放射性碘标记(间接标记法)。
放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。此技术的优点是灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量小。