答 (1)材料和提取瓶充分干燥。(2)材料尽可能的不损失。(3)提取充分完全。(4)提取后瓶子还要充分的干燥。

无

答 纸层析是分配层析,利用分配系数不同,即氨基酸在两相中的溶解能力不同。离子交换层析利用氨基酸是两性物 质,在一定pH下不同氨基酸带电性质和带电量不同,因此交换能力不同。 纸层析步骤:滤纸准备、样品处理、点样、 平衡、展开、显色和定性定量分析。柱层析步骤:固定相准备、装柱、上柱、洗脱和收集、定性定量分析。 试述凝 胶层析原理,说明凝胶层析的应用并列出常用凝胶名称(10分)。 凝胶层析柱装有多孔凝胶,当含有各组分的混合液流 经凝胶层析柱时,各组分在层析柱内同时进行两种不同的运动。一种是随着溶液流动而进行的垂直向下的移动,另一 种是无定向的分子扩散运动。大分子物质由于分子直径大,不能进入凝胶微孔,只能分布于凝胶颗粒的间歇中以较快 速度流过凝胶柱。较小的分子能进入凝胶微孔,不断进出一个个颗粒的微孔内外,因此流动速度较慢,从而使混合溶 液中各组分按照相对分子量由大到小顺序先后流出层析柱得到分离。 应用:不同分子量蛋白质分离、蛋白质分子量 测定、蛋白质脱盐等。 常用凝胶:葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。

无

答 样品应点在负极端,因为电泳缓冲液PH=8.3,在这样的环境中,血清蛋白的几种蛋白质电离后都带上负电荷,所以只 有点样在负极端,外加电压后,才能向正极移动,彼此才能分开。

无

答 (1)用定糖法检测。(2)用紫外分光光度计检测。(3)用琼脂糖凝胶电泳检测。等

无

答 (1)琼脂含液体量 大,可达98-99%,近似自由电泳,但是样品的扩散度比自由电泳小,对蛋白质的吸附 极微。(2)琼脂作 为支持体有均匀,区带整齐,分辨率高,重复性好等优点。(3) 电泳速度快。(4)透明而不吸收紫外线,可以直接用紫外检 测仪作定量测定。(5) 区带易染色,样品易回收,有利于制止备。然而琼脂中有较多硫酸根,电渗作用大。 琼脂糖是从 琼脂中提取出来的,是由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多 糖。含硫酸根比琼脂少,因而分离效果明显提 高。 琼脂(糖)电泳常用缓冲液的pH在6-9之间,离子强度为0.02-0.05。离子强度过 高时,会有大量电流通过凝胶,因而产 生热量,使凝胶的水份量蒸发,析出盐的结 晶,甚至可使凝胶断裂,电流中断。常用的缓冲液有硼酸盐缓冲液与巴比妥 缓冲液。 为了防止电泳时两极缓冲液槽内pH和离子强度的改变,可在每次电泳后合并两极槽内 的缓冲液,混匀后再 用。

无

一种利用带孔凝胶珠作基质,按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。凝胶过滤层析具有分子筛效 应。

无

亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理,将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种 可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。

无

离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相,利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离 子型化合物的一种方法。

无

电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核 酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所 带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分 子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。

无

凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大 小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小“排队,凝胶表现分子筛效应。

无