ELISA技术应用广泛,几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可以检测,但不用于基因检测。
钩状效应是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象,其中抗体过量叫做前带效应,抗原过量叫做后带效应。抗原抗体特异性反应时,生成结合物的量与反应物的浓度有关。无论在一定量的抗体中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗体,均可发现只有在两者分子比例合适时才出现最强的抗原-抗体反应。
药物多数分子量很小,为半抗原。免疫电泳的方法不够灵敏,不适于测定半抗原。
血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在,后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法,先将所有血清IgM(包括特异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。
HBsAg(+)表示体内感染了HBV的特异性标志;HBeAg(+)表示患者血液有感染性;抗-HBcIgM(+)提示新近HBV感染并有病毒增殖,有助于诊断急性乙型肝炎。
斑点-ELISA的原理与常规ELISA相同,不同之处在于斑点-ELISA采用的固相载体为对蛋白质具有很强吸附力的硝酸纤维素膜,故检测灵敏度高,是普通ELISA的6~8倍。如果膜上固定多种抗原,可同时检测多种抗体。
①竞争法:以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合;②双抗体夹心法:是使同相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合;③间接法:是利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体。
辣根过氧化物酶在蔬菜作物中,辣根含量很高,纯化不复杂;碱性磷酸酶提取于小牛肠黏膜或大肠杆菌;脲酶在体内没有内源酶;β-半乳糖苷酶能水解底物产生荧光物质4-甲基伞酮。
选择ELISA的标记用酶,保证标记抗原后,酶活性保持稳定。
NaN3破坏HRP的结构与活性。