斑点-ELISA的原理与常规ELISA相同,不同之处在于斑点-ELISA采用的固相载体为对蛋白质具有很强吸附力的硝酸纤维素膜,故检测灵敏度高,是普通ELISA的6~8倍。如果膜上同定多种抗原,可同时检测多种抗体。
酶结合物是指用酶标记后的抗原或抗体。
ELISA技术应用广泛,几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可以检测,但不用于基因检测
OPD在HRP作用下显橙黄色,加强酸终止反应呈棕黄色,最大吸收峰波长为492nm。TMB经HRP作用后变为蓝色,加入硫酸终止反应后变为黄色,最大吸收峰波长为450nm。p-NPP经AP作用后的产物为黄色对硝基酚,最大吸收峰波长为405nm。
在双抗体夹心法一步法中,当待测抗原浓度过高时,过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成,出现钩状效应,只有将标本稀释后重新检测才有可能得到准确的试验结果。
酶免疫分析(enzymeimmunoassay,EIA)固相载体目前国内外一般均使用聚苯乙烯塑料,此种材料具有很好的光透性和蛋白质吸附能力。聚氯乙烯也可使用,最适载体为阳性和阴性标本测定结果差别最大者。
β-半乳糖苷酶能水解底物产生荧光物质4-甲基伞酮。
辣根过氧化物酶在蔬菜作物中,辣根含量很高,纯化不复杂