异硫氰酸荧光素呈明亮的黄绿色荧光;四乙基罗丹明呈橘红色荧光;四甲基异硫氰酸罗丹明呈橙红色荧光;藻红蛋白呈明亮的橙色荧光。
F/P为荧光素与蛋白质的结合比率,F/P比值越大,表明抗体分子结合的荧光素越多,一般用于组织切片的荧光抗体,其F/P=1.5为宜,用于活细胞染色以F/P=2.4为宜。
藻红蛋白(R-RE)呈亮明的橙色荧光,与异硫氰酸荧光素(FITC)的翠绿色荧光对比鲜明,故被广泛用于在对比染色或用于两种不同颜色的荧光抗体的双重染色。
荧光是指在极短时间内发射出的波长大于激发光波长的光。
荧光素与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。
间接法可用于检测抗原和抗体,本法有两种抗体相继作用,第一抗体为针对抗原的特异抗体,第二抗体(荧光抗体)为针对第一抗体的抗抗体。本法灵敏度高,而且在不同抗原的检测中只需应用一种荧光抗体。
最好尽快做镜检,以防荧光消退,影响结果。
由于抗核抗体(ANA)的复杂性及多样性,故测定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。常用间接免疫荧光法(indirect immuno-fluorescence,IIF)作为总的ANA筛选试验。